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作品简介:

本专辑汇编了马学军研究员(博士生导师)作为作者或通信作者发表在《病毒学报》的21篇学术论文,汇集了病毒学,病原生物学的前沿理论实验方法的建立及应用,对今后进一步开展相关工作具有重要的借鉴和参考作用。

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墨林
病毒学报编辑部
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本人受病毒学报的委托,为本论文汇编代序,心存感激。中国疾控中心病毒病所中心实验室是2007年成立的以技术为导向的实验室,其研究方向是开展未知病毒发现和鉴定、病毒病症候群监测、高通量、自动化、现场检测和生物信息学等相关技术平台的研究和应用工作。本期汇编的21篇论文基本反映了近10年病毒性病原体分子检测技术的进展和应用现状。其中论文1-10是关于等温扩增技术(RCA,LAMP和IMSA)和芯片技术的建立和应用;论文11是关于多重荧光定量PCR技术的建立和应用;论文12-16是关于新型多重PCR技术的建立和应用;论文17-18是关于新型芯片技术(再测序芯片)的建立和应用;论文19-21分别是等温扩增技术、多重PCR技术和小RNA深度测序技术的综述。

目前分子检测技术的发展日新月异,特别是新一代测序技术(NGS)已经广泛应用于传染病的预防和控制,本论文汇编未包括该领域的应用实例,另外,本论文汇编反映的是当时技术的应用,错误在所难免,如果对于各位同行现在的工作有一定的帮助,作者将甚感欣喜和满足。最后,再次感谢病毒学报编辑部对我实验室的大力支持和帮助,我们将继续不忘初心,继续努力。

中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

中心实验室

马学军 主任

2016-08-19

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第1章 等温扩增技术和芯片技术
1.滚环复制技术的建立及在RNA病毒基因检测中的初步应用
李启明;马学军
滚环复制是噬菌体繁殖所采取的一种基因复制方式,这种方式可使单链的环形分子在聚合酶和引物的作用下进行体外自我扩增。本文中用可特异性连接环化的寡核苷酸链作为探针,分别进行了1份细胞培养的禽流感病毒H5N1亚型样品、1份细胞培养的SARS病毒样品和4份丙型肝炎病毒阳性血清样品的检测。检测...   详情>>
来源:《病毒学报》 2005年第04期 作者:李启明;马学军
2.采用基因微阵列技术对常见呼吸道病毒进行检测的初步研究
孙梅生;王征
建立一种高通量的基因微阵列检测技术,对常见呼吸道病毒感染进行监控。根据公开发表的8个病毒科38种常见呼吸道病毒的序列,计算其保守区域,设计病毒的特异性检测探针,制备呼吸道病毒检测基因微阵列。利用随机引物PCR方法标记样品中的病毒靶序列,标记产物与基因微阵列上的探针杂交,清洗、扫描后...   详情>>
来源:《病毒学报》 2005年第06期 作者:孙梅生;王征
3.利用寡核苷酸微阵列技术对HBV、HCV、HIV、HAV、GBV-C/H...
周蕊;马学军
探讨研制能同时检测HBV、HCV、HIV、HAV、GBV-C/HGV和B19的微阵列监控芯片。根据病毒公开发表序列,序列比对,得出保守区域,设计病毒的特异性检测探针,同时设置阴性、阳性参照探针,制备监控微阵列。利用随机引物PCR方法标记样品中的病毒靶序列,标记产物与微阵列上的探针杂交,清洗、扫描后进行结...   详情>>
来源:《病毒学报》 2006年第02期 作者:周蕊;马学军
4.环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)在丙型肝炎病毒基因...
李启明;马学军
该文介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增基因检测技术,该技术分别使用特异对应于靶序列中8个基因区段的3对特殊引物,并在反转录酶和Bst-DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应,整个检测反应只需1~2h。利用这种技术成功检测了丙型肝炎病毒基因,对60份经Real-time PC...   详情>>
来源:《病毒学报》 2006年第05期 作者:李启明;马学军
5.逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)在H5N1禽流感病...
李启明;马学军
建立一种便捷、灵敏的检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)用于H5N1亚型禽流感病毒基因检测。该技术使用特异对应于靶序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下进行核酸扩增反应。对51份实验感染动物及病毒培养标本的H5N1亚型禽流感病毒的HA、NA基因区进行了RT-LAMP检测,并...   详情>>
来源:《病毒学报》 2008年第03期 作者:李启明;马学军
6.基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增技术检测人甲型H1N...
聂凯;王大燕
建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导逆转录等温核酸扩增技术(RT-LAMP)应用于人甲型H1N1流感病毒基因检测。该技术使用对应于人甲型H1N1流感病毒HA序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下(65℃)进行核酸扩增反应1.5h,在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应...   详情>>
来源:《病毒学报》 2010年第02期 作者:聂凯;王大燕
7.基于颜色判定的环介导等温扩增技术检测HPV6和HPV16
芦春斌;罗乐
建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导等温核酸扩增技术(LAMP)应用于HPV6和HPV16亚型的检测。该技术设计分别对应于HPV6和16的E6和E7基因序列中6个区段的4条特异引物,在等温条件下(63℃)进行核酸扩增反应1h,在扩增前加入HNB染料(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB染料...   详情>>
来源:《病毒学报》 2011年第01期 作者:芦春斌;罗乐
8.基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增技术检测GII型诺如...
罗剑鸣;吴希阳
建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediatedisothermal amplification,RT-LAMP)方法应用于GII型诺如病毒基因检测。针对诺如病毒RNA依赖的RNA聚合酶和衣壳蛋白基因序列(RNA-dependant RNA polymerase and capsid protein gene)设计...   详情>>
来源:《病毒学报》 2012年第02期 作者:罗剑鸣;吴希阳
9.环介导逆转录等温扩增技术检测中东呼吸综合征冠状病毒基...
关丽;聂凯
建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测。针对MERS-CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特...   详情>>
来源:《病毒学报》 2015年第03期 作者:关丽;聂凯
10.埃博拉病毒扎伊尔亚型多引物自配引发等温扩增方法的建立
李鑫娜;聂凯
鉴于目前埃博拉疫情在西非流行和输入国内的潜在风险,开发快速准确易普及的检测埃博拉病毒的方法对埃博拉防控具有重大意义。本文拟建立一种基于颜色判定简单、快速和灵敏的方法,即多引物自配引发等温扩增技术(isothermal multiple self-matching initiated amplification,IMSA)应用于埃博拉病...   详情>>
来源:《病毒学报》 2016年第01期 作者:李鑫娜;聂凯
第2章 多重荧光定量技术
1.同时检测新甲型H1N1及人季节性H1N1和H3N2流感病毒的单管...
秦萌;王大燕
本研究设计的一种4重荧光定量RT-PCR检测方法,以A型流感病毒各亚型的血凝素基因(HA)为检测靶标,实现了同时检测新甲型H1N1流感病毒、人季节性H1N1流感病毒和人季节性H3N2流感病毒。本法使用人细胞RNA酶P基因作为内参,以判断标本来源和实施质量控制。利用不同来源和亚型的流感病毒验证了该方法...   详情>>
来源:《病毒学报》 2010年第02期 作者:秦萌;王大燕
第3章 新型多重PCR技术
1.建立新型的常见腹泻相关病毒的多重检测方法
刘艳;徐子乾
利用GenomeLab(tm)GeXP遗传分析系统建立一种同时检测A组轮状病毒、诺如病毒GI、GII型、札如病毒、肠道腺病毒、星状病毒、人博卡病毒II型7种常见腹泻相关病毒的方法。对反应条件进行优化后,非同日三次重复实验表明至少在104拷贝/μL水平可同时特异地检测出7种病毒,对Enterovirus71、Human Pa...   详情>>
来源:《病毒学报》 2011年第03期 作者:刘艳;徐子乾
2.GeXP多重基因表达遗传分析系统在手足口病病原分型检测中...
胡秀梅;张勇
利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,同时检测引起手足口病的9种常见的人肠道病毒—人肠道病毒71型(HEV71)、柯萨奇病毒A组(CVA)16、4、5、9、10型和柯萨奇病毒B组(CVB)1、3、5型。优化多重反应体系中针对5'UTR区的肠道病毒通用引物和11对针对9种...   详情>>
来源:《病毒学报》 2011年第04期 作者:胡秀梅;张勇
3.GeXP多重PCR技术同时检测12种常见呼吸道病毒
李瑾;毛乃颖
本研究建立了一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的多重RT-PCR检测方法,该方法可以同时检测12种呼吸道病毒,包括流感病毒A型和B型、季节性H1N1、副流感病毒1~3型、人鼻病毒、人偏肺病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒A型和B型、人博卡病毒。针对病原体保守区序列设计12种病毒的特异性引物,分别...   详情>>
来源:《病毒学报》 2011年第06期 作者:李瑾;毛乃颖
4.8种脑炎相关虫媒病毒GeXP检测方法的初步建立
何玢;王环宇
利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种多重逆转录-聚合酶链反应(mRT-PCR)方法,同时检测与病毒性脑炎相关的乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)等8种虫媒病毒。优化多重反应体系及反应条件,分别以病毒分离培养物和阳性标本来验证多重反应体系的特异性,以克隆质粒体外转录的R...   详情>>
来源:《病毒学报》 2012年第01期 作者:何玢;王环宇
5.GeXP多重基因表达遗传分析系统对2009~2012年济南市手足...
关恒云;杨梦婕
本研究旨在利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,检测与手足口病密切相关的多种肠道病毒类型,探明济南市手足口病病原谱的构成。选取济南市2009~2012年6月手足口病病例标本274例,经多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,研究与手足口病密切相关的15种肠道病毒...   详情>>
来源:《病毒学报》 2014年第05期 作者:关恒云;杨梦婕
第4章 新型芯片技术(再测序芯片)
1.一种基于新型再测序芯片的不明原因呼吸道感染样品检测方...
申红卫;李瑾
再测序芯片(Resequencing Pathogen Microarray,RPM)是一种新的基于微阵列DNA芯片的病原体检测与鉴定技术。为了将RPM应用于不明原因呼吸道感染的检测,提高应对传染病暴发的能力,本研究建立了基于一种新型RPM的呼吸道多病原检测方法。该方法可以同时检测19种常见呼吸道病毒、9种甲型流感(Flu ...   详情>>
来源:《病毒学报》 2013年第02期 作者:申红卫;李瑾
2.一种基于新型再测序芯片的不明原因腹泻样品检测方法的建...
王佶;徐子乾
本研究建立了一种基于新型再测序芯片(Resequencing Pathogen Microarray,RPM)的腹泻症候群多病原检测方法,能同时检测14种轮状病毒,7种杯状病毒,8种星状病毒,28种肠道病毒,16种少见致泻病毒。选取已验证的阳性病毒样本为模板来评估该方法的特异性。用克隆质粒和体外转录的RNA梯度稀释液来检验...   详情>>
来源:《病毒学报》 2014年第02期 作者:王佶;徐子乾
第5章 其他(等温扩增技术、多重PCR技术和小RNA深度测序技术)
1.环介导等温扩增技术的改进及其在现场检测平台上的应用进...
关丽;马学军
环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型核酸体外扩增技术,具有等温、快速、高特异性和灵敏度、产物检测简便等特点。自建立以来,该技术被广泛应用于病原检测、动物胚胎的性别鉴定、转基因食品检测和肿瘤的基因检测等领域并得到不断改进和完善,主要体现在...   详情>>
来源:《病毒学报》 2014年第04期 作者:关丽;马学军
2.新型多重PCR方法及其在呼吸道病毒诊断上的应用
李瑾;申红卫
急性呼吸道感染广泛分布于人群中,主要由呼吸道病毒引起,在老年人和婴幼儿中具有较高的发病率和死亡率,给社会带来严重的经济负担。快速、准确检测出病原体对临床早期诊断和指导治疗有重要意义。多重聚合酶链式反应(PCR)技术具有PCR的高灵敏度和快速检测的特点,还能实现多病原的高通量检测。基...   详情>>
来源:《病毒学报》 2013年第06期 作者:李瑾;申红卫
3.基于小RNA(sRNA)深度测序技术进行病毒鉴定和发现的研究...
李洋;王昊
sRNA深度测序技术是2009年起新兴的可用于病毒研究的组学技术,它突破了传统病毒鉴定技术的局限,直接以宿主中sRNA(small RNA)为研究对象,可以快速地鉴定侵染宿主的病毒组成。是一种发现新病毒,监控病毒变异的有效方法。人们用这种方法发现了很多有意义的病毒,研究领域涉及到植物、无脊椎动物和...   详情>>
来源:《病毒学报》 2015年第04期 作者:李洋;王昊

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